项目领域：生物技术

项目简介：总体情况：众所周知，制备高纯度高生物学活性的抗原是创制高品质固相酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒的关键。我们研发的高效酵母生产体系是一种快速高效的新型蛋白表达工具，生产与纯化工艺操作简单方便易行。关键技术：全新的毕赤酵母真核表达分泌技术制备生产出蛋白酪氨酸磷酸酶2A、谷氨酸脱羧酶65、锌转运体8蛋白抗原，解决了以往的原核表达体系所制备的抗原蛋白难提取，产量偏低，而且免疫活性偏低的技术难题。同时发酵后蛋白的提取纯化优于现有技术，所制备的高纯度IA-2抗原、GAD65抗原、ZnT8抗原纯度高达98%，免疫原性强，产量高，发酵水平达10克/升。具备了产业化生产的基础。技术创新：第一，含多拷贝基因分泌型表达载体已经构建成功，并且成功在毕赤酵母获得高表达。第二，具有细胞外分泌的特性的生产工艺，使得发酵后蛋白的提取纯化优于现有技术。第三，检测方法的改变。采用双抗原夹心法，取代目前市场上的间接法，提高了检测的特异性，减少了假阳性。创制的糖尿病固相酶联免疫吸附检测法（ELISA）试剂盒使用高纯度IA-2抗原、GAD65抗原、ZnT8抗原来包被聚苯乙烯平板，并且使用高纯度抗原蛋白来制备酶标抗原，采用双抗原夹心法来检测人外周血的糖尿病自身抗体，包括IA-2抗体、GAD65抗体、ZnT8抗体。146例新发1型糖尿病小试显示，该试剂盒在灵敏性、特异性、重复性方面均优于国外同类产品，而价格仅为国外同类产品的1/4到1/3，具有极大的市场竞争力。环保评价：我们的重组酵母生产工艺温和、高效、省时、节能、无污染、绿色环保。项目申报专利，可以保护商业开发。本项目的成功将打破我国糖尿病酶联免疫试剂市场被外国垄断的被动状态，打破国外大生物公司的技术和价格的垄断，以具有独立自主知识产权的糖尿病酶联免疫试剂盒占领中国市场开创崭新局面。该项目的实施将填补糖尿病检测试剂市场的国内空白，尤其是锌转运体8检测试剂盒目前国内还没有上市，项目的实施具有占领国际国内市场的先发优势。